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Université de Rennes 1 — Équipe de Biologie Buccale, EA 1256. UFR d’Odontologie, 2, Place Pasteur, 35000 Rennes, Francia. Responsabile: Prof.ssa Martine Bonnaure-Mallet.

Recapiti stampati sul documento: Tel.: 99 63 19 55 / Fax: 99 38 24 77.

Microscopia elettronica a scansione (MEB): × 10 — Spazzolino Broxobrush. Rapporto: WARNER-LAMBERT Santé Grand Public.

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L. Bunetel, S. Tricot-Doleux, M. Bonnaure-Mallet. Équipe de Biologie Buccale, EA 1256, Faculté d’Odontologie, 2, Place Pasteur, 35000 Rennes.

Lo scopo di questo studio è confrontare quantitativamente in vitro la ritenzione di 3 microrganismi su 4 diversi tipi di spazzolino.

I — Materiali e metodo

1 — Spazzolini testati

La ritenzione dei microrganismi è stata valutata su 4 tipi di spazzolino: 3 spazzolini elettrici delle marche Broxobrush, Braun e Sonicare e uno spazzolino manuale della marca Jordan, denominati rispettivamente spazzolino Broxobrush, spazzolino Braun, spazzolino Sonicare e spazzolino Jordan.

2 — Microrganismi testati

Sono stati testati i seguenti microrganismi: Porphyromonas gingivalis ATCC 33277; Streptococcus mutans ATCC 25175; Candida albicans ATCC 26555.

Per eseguire il test nella fase esponenziale di crescita, i microrganismi sono stati sottoposti a due subcolture successive a intervalli di 24 ore. Le concentrazioni utilizzate in tutte le prove erano di 10⁶/mL per i batteri e di 10⁵/mL per Candida.

Le concentrazioni iniziali sono state regolate dopo un lavaggio delle colture in R.T.F. (reduced transfert fluid) preridotto per Porphyromonas gingivalis, in PBS (tampone fosfato) per Streptococcus mutans e Candida albicans, e dopo la lettura della densità ottica. Le soluzioni di lavoro sono state preparate alla concentrazione desiderata in RTF per Porphyromonas gingivalis e in PBS per Streptococcus mutans e Candida albicans.

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3 — Protocollo

La testina di 2 spazzolini di ciascuna categoria è stata immersa e agitata al vortex per 3 minuti nella soluzione di uno dei microrganismi.

Il primo spazzolino di ciascun lotto è stato poi immerso e agitato al vortex per 1 minuto in 15 mL di Todd Hewitt preridotto (per Porphyromonas gingivalis e Streptococcus mutans) o di Sabouraud (per Candida albicans). Questo volume è stato scelto in modo da immergere l’estremità per 4 cm, cioè la parte dello spazzolino che entra in bocca. Sono state effettuate diluizioni del brodo da 10⁰ a 10⁻⁵ per definire le condizioni ottimali. Cento µL di ciascuna diluizione sono stati seminati su agar Todd Hewitt (per Porphyromonas gingivalis), agar Columbia (per Streptococcus mutans) e Sabouraud (per Candida albicans), con la tecnica di spatolamento. Questa prima fase è stata ripetuta 3 volte e costituisce il tempo T₀.

Il secondo spazzolino di ciascun lotto è rimasto per 24 ore all’aria, protetto da una guaina di plastica che consentiva la circolazione dell’aria, ed è stato poi trattato come il precedente. Questa seconda fase è stata ripetuta 3 volte e costituisce il tempo T₂₄.

Le piastre così seminate sono state collocate in incubatori in funzione delle specifiche caratteristiche di coltura. Le CFU (unità formanti colonia) di Porphyromonas gingivalis sono state contate dopo 7 giorni di incubazione in anaerobiosi a 37 °C. Le CFU di Streptococcus mutans sono state contate dopo 48 ore di incubazione in un incubatore a CO₂ a 37 °C. Le CFU di Candida albicans sono state contate dopo 48 ore di incubazione in aerobiosi a 30 °C.

II — Risultati

1 — Messa a punto

Per ciascun microrganismo testato è stato necessario mettere a punto inizialmente sia la quantità di microrganismi nell’inoculo sia le diluizioni da seminare. Le condizioni sperimentali ottimali sono le seguenti:

Porphyromonas gingivalis: semina a 10⁶ batteri per mL in RTF. T₀: 10⁰; 10⁻¹; 10⁻² su agar Todd Hewitt. T₂₄: 10⁰; 10⁻¹; 10⁻² su agar Todd Hewitt.

Streptococcus mutans: semina a 10⁶ batteri per mL in PBS. T₀: 10⁰; 10⁻¹; 10⁻² su agar Columbia. T₂₄: 10⁰; 10⁻¹; 10⁻² su agar Columbia.

Candida albicans: semina a 10⁵ lieviti per mL in PBS. T₀: 10⁻¹; 10⁻²; 10⁻³ su Sabouraud. T₂₄: 10⁻¹; 10⁻²; 10⁻³ su Sabouraud.

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2 — Conteggi

Dopo questa messa a punto, considerando le medie dei 9 conteggi effettuati, si ottengono i seguenti risultati, espressi in CFU/mL.

La colonna «deviazione standard» rappresenta la deviazione standard sulla media. La colonna % rappresenta la percentuale dell’inoculo iniziale ritrovata sulle piastre dopo il conteggio.

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3 — Risultati statistici

Confronto dei conteggi a T₀ e a T₂₄ per uno stesso tipo di spazzolino

I conteggi dei microrganismi sono stati confrontati in tutti i casi utilizzando un test di Student e un test di Fisher. I risultati dei test sono riportati nella tabella seguente: T, test di Student; F, test di Fisher. Quando il risultato dei conteggi è uguale a zero, il calcolo della varianza mediante il test di Fisher è impossibile (divisione per zero). I risultati sono forniti per una probabilità p < 0,05. Il test di Fisher valuta la distribuzione delle due popolazioni da studiare. Perché due popolazioni siano confrontabili, il risultato del test di Fisher deve essere non significativo. In questo caso, il test di Student, se non significativo, permette di concludere che le popolazioni confrontate sono identiche. Viceversa, se il test di Student è significativo, le popolazioni sono diverse.

I risultati numerici dei test sono disponibili presso il laboratorio.

Per Porphyromonas gingivalis e Streptococcus mutans, qualunque sia il tipo di spazzolino testato, la situazione a T₂₄ risulta significativamente diversa da quella a T₀. Porphyromonas gingivalis e Streptococcus mutans non sopravvivono sugli spazzolini Broxobrush, Sonicare e Jordan, ma sopravvivono sugli spazzolini Braun. Candida persiste su tutti gli spazzolini. I conteggi di Candida albicans ottenuti a T₀ sono simili a quelli ottenuti a T₂₄ per gli spazzolini Broxobrush, Braun e Sonicare. Sugli spazzolini Jordan il microrganismo sembra essere in grado di moltiplicarsi.

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Confronto tra spazzolini

I risultati dei test di Student e di Fisher ottenuti a T₀ sono riportati nella tabella seguente:

S: test significativo; NS: test non significativo. I risultati numerici sono disponibili presso il laboratorio. Le popolazioni evidenziate in grigio nella tabella sono popolazioni diverse per i conteggi, pur presentando una distribuzione omogenea.

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I risultati dei test di Student e di Fisher ottenuti a T₂₄ sono riportati nella tabella seguente:

III — Discussione

Per quanto riguarda la ritenzione iniziale di Porphyromonas gingivalis, gli spazzolini Broxobrush, Braun e Jordan presentano le stesse caratteristiche. Gli spazzolini Sonicare si comportano diversamente, trattenendo meno il microrganismo. Questa differenza non appare tuttavia significativa, poiché la distribuzione delle popolazioni (test di Fisher) è diversa. Il fenomeno è legato alle difficoltà di riproducibilità della tecnica delle CFU per i microrganismi anaerobi. Dopo 24 ore gli spazzolini non presentano più differenze tra loro. Questo risultato non sorprende, poiché P. gingivalis è un microrganismo anaerobio stretto, quindi incapace di resistere all’esposizione all’aria. Occorre tuttavia notare che, sebbene i test statistici non siano significativi, P. gingivalis è in grado di sopravvivere sugli spazzolini Braun.

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Se gli spazzolini Sonicare trattengono meno P. gingivalis degli altri a T₀, il loro comportamento nei confronti di Streptococcus mutans è diverso. Questo microrganismo sembra infatti aderire meglio agli spazzolini Sonicare che agli spazzolini Broxobrush. Dopo 24 ore S. mutans persiste debolmente sugli spazzolini Sonicare e in modo significativo sugli spazzolini Braun, mentre gli spazzolini Broxobrush e Jordan non ne consentono la sopravvivenza. S. mutans è un microrganismo aerobio-anaerobio preferenziale fragile, il che ne spiega la scarsa sopravvivenza dopo 24 ore.

I 4 tipi di spazzolino testati consentono l’adesione iniziale di Candida albicans. Gli spazzolini Braun trattengono inizialmente il microrganismo più degli altri. Dopo 24 ore i conteggi di Candida sono del tutto confrontabili con la situazione iniziale per gli spazzolini Broxobrush, Braun e Sonicare. Gli spazzolini manuali Jordan favoriscono la moltiplicazione del microrganismo. Candida albicans è un lievito aerobio preferenziale molto resistente, il che ne spiega la sopravvivenza.

IV — Conclusione

Quando gli spazzolini presentano, per la loro concezione, una nicchia a livello del manico capace di mantenere un’anaerobiosi relativa, consentono la sopravvivenza di microrganismi anaerobi o aerobio-anaerobi preferenziali. Nel nostro studio è il caso dello spazzolino Braun. Ciò è dimostrato dalla sopravvivenza di P. gingivalis e di S. mutans dopo 24 ore. Gli spazzolini che non presentano questa caratteristica non consentono la sopravvivenza di questi microrganismi.

Risulta che tutti gli spazzolini consentono la sopravvivenza, e persino la moltiplicazione, di microrganismi aerobi.

Il nostro studio evidenzia la possibile reinoculazione dei cavi orali malati attraverso lo spazzolino. Tale reinoculazione varia in funzione del tipo di spazzolino utilizzato. La presenza di una nicchia di anaerobiosi relativa non è probabilmente l’unico fattore coinvolto. L’adesione iniziale dei microrganismi orali e la loro sopravvivenza possono certamente variare in funzione della qualità della plastica del manico e della finitura delle setole dello spazzolino.

Fine del testo del documento — note editoriali separate

Facsimile originale conservato

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